當前位置:首頁 > 細胞粉碎機對核桃楸樹皮提取物的抗腫瘤作用

細胞粉碎機對核桃楸樹皮提取物的抗腫瘤作用

[導讀]研究核桃楸樹皮提取物的抗腫瘤作用。方法:以超聲波輔助及減壓蒸餾法浸提核桃楸樹皮, 用核桃楸樹皮提取物對S180 肉瘤和H 22 肝荷瘤小鼠進行體內、體外抑瘤實驗, 并與空白對照組進行比較。

  核桃楸(J ug lans mandshurica Maxim)又名胡桃楸、山核桃、小核桃等, 為胡桃科胡桃屬落葉喬木。主要分布于我國東北地區, 甘肅、四川等地也有少量分布。核桃楸是我國重要的藥源植物, 據史料記載,其樹皮、根皮、葉片、未成熟外果皮及外殼均可入,F代研究表明, 核桃楸具有抗菌、消炎、抗癌等作用, 特別是抗腫瘤作用尤為顯著, 核桃楸各部位的提取物治療癌癥早已有廣泛應用, 其化學成分中的胡桃醌(juglone 5-hydrox y-1 , 4-naphthoquinone)為其抗腫瘤主要活性成分之一 。在我國民間廣泛流傳用胡桃楸樹皮煮水喝治療腫瘤。報道胡桃醌可直接抑制體外培養腫瘤細胞的增殖。但目前尚無對核桃楸樹皮提取物抗腫瘤活性的臨床研究報道。本實驗選用S180 肉瘤和H22 肝荷瘤小鼠作為研究對象, 觀察核桃楸樹皮提取物的抗腫瘤效應, 為核桃楸樹皮提取物的臨床應用提供理論依據。

材料

  JY96 -IIN 超聲波細胞粉碎機(寧波新芝生物科技股份有限公司);DG5033A 酶聯免疫檢測儀(南京華東電子集團醫療裝備有限責任公司);RPMI 1640 培養液(美國Gibco 公司);四甲基偶氮唑鹽(M TT , 華美生物工程公司);二甲基亞砜(廈門星隆達化學試劑有限公司);環磷酰胺注射液(C TX , 江蘇恒瑞制藥有限公司, 批號08031021);核桃楸樹皮樣品(于2007 年6 月采自四川省汶川縣三江鄉中藥材基地,樹齡約20 年, 鑒定員300859);S180 瘤株(重慶醫科大學海扶腫瘤治療中心);H22 瘤株(重慶醫科大學醫學檢驗系);選用健康昆明種(KM)小鼠, 體質量19 ~ 23 g , 6 ~ 8 周齡, ♀♂兼用[ 重慶騰鑫生物技術有限公司, 動物合格證號:SCXK(渝)20020002] 。

方法

核桃楸樹皮有效成分的提取

  精密稱取核桃楸樹皮樣品1 000 g , 以水-乙醇溶液為浸提液, 浸提液體積與樣品質量比為10∶1(mL/g)。在超聲波功率為300 ~ 500 W , 溫度30 ~ 50 ℃的條件下, 浸提10 ~ 30 min 。然后將超聲波輔助浸提后的物料進行減壓蒸餾。以氯仿萃取餾出液, 通過重結晶和色譜法對產品進行分離和純化。得到棕黃色針狀結晶820 mg(主要成分胡桃醌)。

核桃楸樹皮提取物抑制小鼠S180 肉瘤的作用

 取接種8 d , 腫瘤生長良好且無潰破的腹水型S180荷瘤小鼠, 頸椎脫臼處死, 固定于蠟板上, 腹部皮膚用碘酊、乙醚消毒后, 取腹水(抽取出的腹水為乳白色的濃稠液體, 置無菌容器內冰塊上保存, 取一滴于載玻片上, 推片, 瑞氏染色, 鏡下進行細胞分類計數,其中瘤細胞數為97 .7 %)。用生理鹽水稀釋成1 ×107 個/mL 個瘤細胞的懸液, 接種于實驗小鼠右前肢腋窩皮下, 每只小鼠接種0 .2 mL 瘤細胞懸液。將接種S180 肉瘤的小鼠隨機分為空白對照組、實驗用藥組和環磷酰胺陽性對照組, 每組10 只, 標號并稱重。接種S180 肉瘤細胞24 h 后, 空白對照組每只小鼠隔天連續灌胃給與實驗組給藥容積相等的生理鹽水1 次;實驗組每只小鼠隔天按50 , 100 , 200 mg ·kg-1劑量(劑量參照文獻)灌胃給藥1 次;陽性對照組給予環磷酰胺, 每只小鼠隔天按30 mg·kg -1劑量給藥1 次, 腹腔注射。各組小鼠于實驗的第12天, 分別頸椎脫臼處死, 完整剝出瘤體, 稱重, 計算抑瘤率。計算方法:抑瘤率=(空白對照組瘤質量-用藥組瘤質量)/空白對照組瘤質量×100 %。

  核桃楸樹皮提取物抑制小鼠肝癌H22 的作用方法同上。

  核桃楸樹皮提取物體外抗腫瘤作用 分別取接種8 d 生長良好且無潰破的腹水型S180 肉瘤小鼠和腹水型H22 肝癌的小鼠, 頸椎脫臼處死, 固定于蠟板上, 腹部皮膚用碘酊、乙醇消毒后, 取腹水。用含5 %新生胎牛血清RPMI 1640 培養液稀釋成每毫升含1 ×106個瘤細胞的混懸液, 以每孔190 μL 接入96 孔培養板, 在37 ℃、100 %相對濕度、5 %二氧化碳、95 %空氣的培養箱中預培養24 h 。取核桃楸樹皮提取物, 配制成質量濃度分別為25 , 50 , 100 mg ·L-1的溶液;同時設環磷酰胺陽性對照組, 其質量濃度為30 mg·L-1 , 每孔分別加入10 μL 藥液;陰性對照組加相應體積的含5 %新生胎牛血清RPMI 1640培養液。然后將以上各組再置于37 ℃、100 %相對濕度、5 %二氧化碳、95 %空氣的培養箱中培養48 h后, 每孔加MT T 10 μL , 繼續孵育4 h , 棄上清, 每孔加入二甲基亞砜150 μL , 輕輕振蕩使甲臜完全溶解, 轉至酶標板上, 570 nm 波長處測定吸光度(A)。2.5 統計學處理 不同實驗間差異用t 檢驗, 采用S PSS 軟件處理。

結果

  核桃楸樹皮提取物對小鼠S180 肉瘤、小鼠肝癌H22的影響 由表1 可以看出, 核桃楸樹皮提取物各劑量組與空白對照組比較有顯著的抑瘤效果(P <0 .01), 且與劑量呈正相關


相關文章

免费一级av高潮喷水片特黄-无码视频A片免费看-免费喷奶水212在线资源视频-h视频在线观看免费