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金釵石斛總生物堿的提取條件

[導讀]為科學合理開發金釵石斛藥材資源,采用單因素試驗分析提取溫度、乙醇濃度、提取時間、固 液比和提取次數對金釵石斛總生物堿含量的影響,酸堿滴定法測定總生物堿含量。

  金釵石斛藥材為蘭科(Orchidaceae)石斛屬(Dendrobium)植物金釵石斛(Dendrobium。睿铮猓椋欤Lindl.)的新鮮或干燥莖。入藥始載于《神龍本草經》,其性微寒、味甘,具有益胃生津,滋陰清熱的功效。金釵石斛自古以來作為我國名貴中藥材之一,在臨床上有著非常好的療效,主要用于熱病陰傷,口干燥渴,咳嗽痰少,是2010年版中國藥典收錄4種石斛屬藥用植物正品之一,其化學成分主要是倍半萜型生物堿類和多糖類,倍半萜型總生物堿種類十分豐富,其含量往往與該種屬石斛藥材質量、藥效密切相關。若僅針對某2種有效生物堿成分開展金釵石斛的提取和含量測定方法研究,不可避免地導致所建立方法的局限性,系統地建立針對金釵石斛總生物堿的提取和相應含量測定方法十分必要。鑒于此,筆者采用經典酸堿滴定法,運用系統正交優化設計,對金釵石斛總生物堿的提取條件進行優化,以期為金釵石斛藥材及其中藥制劑生產提供理論基礎和指導,以促進我國金釵石斛藥材資源的科學合理開發。



材料與方法

藥材

  金釵石斛(貴陽太升藥材,批號201503),經貴州醫科大學藥學院鑒定為蘭科植物石斛屬金釵石斛(Dendrobium。睿铮猓椋欤濉。蹋椋睿洌欤┑母稍锴o。經粉碎、過20目篩后,得到金釵石斛藥材粗粉,備用。

儀器

  RE-201D旋轉蒸發儀(鄭州英峪予華),RE-201D恒溫水油預鍋(鄭州英峪予華),AY-120電子天平(日本島津),Q-250B高速粉碎機(上海冰都),420型三用水箱(金壇富華),101-1AB型電熱鼓風干燥箱(天津泰斯特),SB-5200D超聲清洗機寧波新芝生物)。

試劑

  試驗所用試劑(濃硫酸、氫氧化鈉、無水乙醇、甲基紅、溴甲酚綠、氯仿等)均為分析純,水為自制蒸餾水。

  硫酸滴定劑的配制:精密量。担恚虧饬蛩岱入裝有少量蒸餾水的100mL容量瓶中,放至室溫,再用蒸餾水稀釋至刻度;取該硫酸溶液5mL 于100mL容量瓶中用蒸餾水稀釋至刻度,得到約0.046mol/L的硫酸溶液。將該硫酸溶液與蒸餾水按1∶3.6混合,經無水碳酸鈉標定后,最終得到0.01mol/L硫酸溶液。氫氧化鈉滴定劑的配制:取適量氫氧化鈉放入小燒杯中加入少量蒸餾水使其飽和。放至室溫后,取該飽和氫氧化鈉溶液10mL于100mL容量瓶中,用蒸餾水稀釋至刻度;取該氫氧化鈉溶液5mL于500mL 容量瓶中,加蒸餾水稀釋至刻度。經0.01mol/L 硫酸溶液標定后, 最終得到0.017。矗恚铮欤虤溲趸c溶液。甲基紅-溴甲酚綠顯色劑的配制:精密稱取0.0500g甲基紅粉末,放入50mL容量瓶中,用無水乙醇溶解并稀釋至刻度,得到0.1%的甲基紅溶液。精密稱。埃保埃埃埃玟寮追泳G粉末,放入50mL容量瓶中,加入無水乙醇溶解并稀釋至刻度,得到0.2%的溴甲酚綠溶液。最后。埃保ゼ谆t溶液20mL與0.2%溴甲酚綠溶液30mL放入50mL容量瓶中混合均勻,得到甲基紅—溴甲酚綠(2∶3,v/v)顯色劑。



結論與討論

  試驗結果表明,金釵石斛總生物堿提取的最佳條件為提取溫度85℃,乙醇濃度90%,提取時間3h,固液比1∶20,提取次數為2次,在該條件下金釵石斛總生物堿的平均提取率為87.8mg/g。金釵石斛藥材資源的合理開發,其實際有效地提取方法與整體質量評價手段是金釵石斛藥材開發的重要環節。生物堿類能客觀體現不同產地、不同采收期、不同批次的金釵石斛藥材品質,試驗采用方法簡單、成本低廉、結果準確的剩余量酸堿滴定法,能夠快速準確地測定藥物提取過程中金釵石斛總生物堿的含量,并通過空白試驗對照與多組平行試驗,最大限度地降低酸堿滴定方法自身誤差,提高試驗結果的準確性和代表性。石斛堿一直被公認為是金釵石斛區別其他石斛品種的特有成分之一,試驗以石斛堿來計算金釵石斛生物堿的含量,能夠準確地、全面地反映金釵石斛藥材的實際質量狀況。以金釵石斛總生物堿為評價指標,進行單因素試驗和L9(34)正交試驗,綜合考察后確定金釵石斛總生物堿的最佳提取條件。在研究過程中發現,提取溫度高于85℃,將明顯降低該藥材中總生物堿的提取率,過高溫度不利于生物堿類成分的穩定性;提取溶液乙醇濃度、提取時間是最影響總生物堿提取率的2個工藝參數,表明小極性的金釵石斛生物堿、苷元類成分所占比例較大;诿鞔_的藥理試驗結果、臨床療效,金釵石斛總生物堿的定性、定量與藥理作用機制研究將是下一步需要解決的問題。




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