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新芝粉碎機-植物細胞的破碎

[導讀]新芝粉碎機-為了得到蛋白,首先要對細胞進行破碎,通常使用的方法有酶解法、冷凍法和機械法. 一般來說,冷凍法效率較低,酶解法則容易引入外源蛋白雜質,因此機械法較常見. 目前最常用的方法為液氮研磨法,但在研磨中需注意提前預冷研缽,用液氮充分凍融組織。

植物細胞的破碎、預分級及蛋白的提取

  為了得到蛋白,首先要對細胞進行破碎,通常使用的方法有酶解法、冷凍法和機械法. 一般來說,冷凍法效率較低,酶解法則容易引入外源蛋白雜質,因此機械法較常見. 目前最常用的方法為液氮研磨法,但在研磨中需注意提前預冷研缽,用液氮充分凍融組織,且快速充分的研磨成粉末,同時迅速加入蛋白沉淀劑( 提取液) 在低溫( -20 ℃) 下充分沉淀.木質化程度較高的植物材料中加入石英砂則可得到較好的破碎效果.

  由于技術的原因,雙向電泳的結果分析范圍有限. 為了降低樣品的復雜性以及實驗目的的需求( 如研究低豐度蛋白) ,可對蛋白質樣品進行分級預處理. 即通過各種手段( 如色譜技術、超速離心、亞細胞分級分離等) ,將蛋白質依據性質和在細胞中位置的不同進行分級,通過分級可以將研究性蛋白進行濃縮或去除干擾性蛋白,以此來有效去除非研究對象的干擾蛋白( 如高豐度蛋白) ,以達到精確研究結果的目的. 未來的分級方向將直接涉及蛋白質生理特性的等電點和疏水性.

  常見的植物蛋白提取方法有兩種,分別是基于酚和TCA( 三氯乙酸) 沉淀的方法. TCA 沉淀法操作簡單,適用于幼嫩植物體; 同時TCA 是一種強酸,可抑制植物中各種蛋白酶的活性,從而起到保護蛋白免于降解的目的. 在實際應用中,往往使用TCA - 丙酮( 含15% ~ 40% TCA) 比單獨的TCA 或丙酮效果好,因丙酮有利于去除溶于有機溶性的雜質,但沉淀的蛋白重新溶解則較困難. 酚抽提法適用于復雜植物,基于該方法可提取更多的糖蛋白,同時酚抽提法中相關試劑毒性較大,且費時費力,因此TCA - 丙酮法在植物蛋白提取中較常用.

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