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龍眼肉超微粉碎提取法

[導讀]分別選取超聲時間、酶添加量和提取時間 3 個因素對超微粉碎纖維素酶輔助提取工藝進行優化。 通過分析多糖基本成分、分子質量、黏度、溶解度等比較熱水浸提法、超微粉碎輔助法和超微粉碎纖維素酶輔助法 3 種方法制得的龍眼果肉多糖(LP、LP-S、LP-SE)的理化特性。 通過分析對巨噬細胞分泌細胞因子的刺激作用,比較 3 種龍眼果肉多糖的免疫活性。

龍眼俗稱 “桂圓”, 是傳統藥食兩用水果,據 《神農本草經》、《本草綱目》等古醫書記載,其具有 養血安神、益智寧心、補益心脾、壯陽益氣、延年益 壽等功效。 現代研究發現,水溶性多糖是其果肉 的主要活性成分之一,具有免疫調節、抗腫瘤、 抗氧化和抗炎等多種功能活性。 基于龍眼生物 活性機制的研究及其開展精深加工的需要, 開展 龍眼果肉多糖的提取技術研究顯得至關重要。 超微粉碎技術是近期出現的一種提取技術, 其可以將原料粉碎至 1nm~100μm 粒徑的微小顆 粒,從而改變原料表面結構,增加原料與提取劑的 接觸面積,實現高效提取。 超微粉碎因具有高效、 節能等特點而逐漸被應用于功能性成分的提取制 備。 有研究表明超微粉碎輔助提取多糖能改變多 糖的分子質量、化學組 成 等,從而影響其生物活 性,然而,超微粉碎技術對龍眼果肉多糖的理化 性質及其免疫調節活性的影響尚鮮見報道。 此外, 生物酶解技術因具有特異性、 高效性被應用于活 性多糖的提取。 等分別優化建立了 超聲波-酶解、酶法提取龍眼多糖的工藝,而對生物酶解與物理的超微粉碎相結合后, 兩者對龍眼 多糖的得率、 理化性質及其免疫活性的影響尚不 知曉。 本研究比較了熱水浸提法、超微粉碎提取法 和超微粉碎-酶法提取技術對龍眼果肉多糖的提 取率、理化性質以及免疫活性的影響。

材料與方法

  材料與儀器 龍眼品種“儲良”,由廣東省農業科學院果樹 研究所提供,于 2016 年 9 月采自其實驗果園。 新 鮮龍眼采用熱風干燥得到龍眼干。 葡萄糖醛酸、葡聚 糖、葡 萄 糖、木 糖、阿 拉 伯 糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖標準品,甲基噻唑基四 唑 (MTT), 纖 維 素 酶 (Cellulase from Aspergillus niger,Sigma-22178),脂多糖(LPS)和青鏈霉素,購 自美國 Sigma 公司;間羥基聯苯,購自日本 TCI 公司;NO 試劑盒、考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒,購自 南京建成科技有限公司;TNF-α、IL-6 和 IL-1β 酶 聯免疫試劑盒, 購自深圳欣博盛生物科技有限公 司;其它試劑均為國產分析純。 小鼠巨噬細胞株 RAW264.7 由中國科學院典 型培養物保藏委員會細胞庫提供, 本實驗室繼代 培養。

  UV-1800 紫外可見分光光度計, 日本島津有 限公司;振動式細胞級超微粉碎機,濟南達微機械 有限公司;冷凍干燥儀,寧波新芝生物科技股份有限公司; GHRH-20 熱泵干燥機, 廣東省農業機械研究所; Eyelan-1100 旋轉蒸發器, 東京理化器械株式會 社;Infinite Pro 200 酶標儀, 瑞士 Tecan 公司;氣 相 色 譜 - 質 譜 聯 用 儀 , 美 國 Agilent 公 司 ; AR1500EX 流變儀, 美 國 TA 公 司;Acquity APC 超高效聚合物色譜系統,美國 Waters 公司。 1.2 試驗方法 1.2.1 龍眼果肉多糖的提取 將龍眼干用 80%的 乙醇浸泡 5 次脫去小分子糖后 50 ℃烘干 72 h,超 微粉碎處理后,按料液比 1 ∶ 40(mg/mL)加入蒸餾 水,勻漿,調節 pH 值,添加適量纖維素酶,浸提一 定時間后,升溫至 90 ℃滅酶 5 min 后過濾,得到龍 眼多糖提取液。 提取率的計算: 多糖提取率=(提取液中總糖 質量-提取液中還原糖質量)/龍眼干質量×100%。 總糖含量采用苯酚-硫酸法,還原糖含量采用 DNS 法。

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